豬瘟抗體ELISA實驗操作要領(lǐng)

山東農(nóng)業(yè)大學(xué)的趙老師于去年12月在我公司代測豬瘟抗體，白介素，干擾素等相關(guān)系列21個指標的ELISA實驗：現(xiàn)需發(fā)表文獻特我公司關(guān)于豬瘟抗體等實驗的詳細操作流程，我司技術(shù)做出如下詳細解答：

1．用包被液將豬瘟弱毒單抗純化酶聯(lián)抗原、豬瘟強毒單抗純化酶聯(lián)抗原各做100倍稀釋，每孔包被100μl，4℃濕盒放置一夜。
2．次日取出，甩去孔內(nèi)液體，3×3′沖洗。
3．將待檢血清以PBS液做400倍稀釋，每孔加100μl同時將豬瘟陽性血清、豬瘟陰性血清各做100倍稀釋，于對照孔中加100μl。37℃溫育1.5h～2h。
4．重復(fù)第二步，取出，甩去孔內(nèi)液體，3×3′洗滌。
5．將兔抗豬IgG酶標抗體以PBS液做100倍稀釋，每孔加100μl，37℃溫育1.5h～2h。
6．重復(fù)第4步。
7．每孔加底物溶液100μl，室溫下觀察顯色反應(yīng)。當(dāng)陰性對照孔稍顯色時，立即終止反應(yīng)，并以陰性孔做空白對照。
8．每孔加終止液50μl立即于酶聯(lián)免疫吸附檢測儀測定490nm波長的光密度。
（三）結(jié)果判定
在豬瘟弱毒酶聯(lián)板上，OD≥0.2，為豬瘟弱毒抗體陽性；OD＜0.2，為豬瘟弱毒抗體陰性。
在豬瘟強毒酶聯(lián)板上，OD≥0.5，為豬瘟強毒抗體陽性；OD＜0.2，為豬瘟強毒抗體陰性。